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国产盐酸西替利嗪片的人体药代动力学及相对生物利用度
发布时间： 2003-10-6 作者：范国荣 李珍 胡晋红 石晶 沈意翔 宋洪杰 王卓
摘 要 目的：研究国产盐酸西替利嗪片的人体药代动力学和相对生物利用度。方法：选择8名男性健康志愿者，采用反相高效液相色谱法，以紫外229 nm为检测波长，测定了单剂量(10 mg)口服国产盐酸西替利嗪片和进口盐酸西替利嗪片在人体内的西替利嗪浓度。结果：盐酸西替利嗪的体内动态过程呈一级吸收的二房室开放模型，国产片和进口片的cmax分别为（316.71±39.66）和（314.80±31.79） ng/ml，tmax分别为（0.72±0.09 ）和（0.72±0.09） h，t1/2β分别为（10.71±3.06）和（9.95±2.41） h，AUC0～∞分别为（2 728.52±356.06）和（2 753.01±360.33） ng*h/ml。结论：国产盐酸西替利嗪片剂的相对生物利用度为（99.50±8.89）％；选择cmax和AUC0～∞进行三因素方差分析与双单侧 t检验，结果表明国产片和进口片两种制剂具有生物等效性。
关键词：盐酸西替利嗪；药代动力学；生物利用度
西替利嗪(cetirizine)是第一代抗组胺药物羟嗪的活性羧酸衍生物，分子结构中的两性离子特征使其无明显的中枢抑制作用，临床主要用于防治过敏性鼻炎、慢性特发性荨麻疹、过敏性哮喘和特异性皮炎等疾病［1,2］。目前，有关盐酸西替利嗪临床药代动力学资料，国外学者已进行了众多的研究，涉及新生儿、幼儿、儿童、青年、老年及一些临床病例等不同群体［3～7］。国内江苏连云港制药厂首先研制了盐酸西替利嗪片，为了评价国产盐酸西替利嗪片在健康人体内的药代动力学和生物利用度，本研究建立了血浆中西替利嗪的反相离子对高效液相色谱（RP-IP-HPLC）测定新方法, 并对国产盐酸西替利嗪片(CET)和进口盐酸西替利嗪片(Zyrtec，仙特敏，ZYR)进行了药代动力学和相对生物利用度研究，以三因素方差分析和双单侧t检验评价两种制剂的生物等效性，为临床应用提供实验依据。
1 材料和方法
1.1 仪器与试药 Waters高效液相色谱仪：Waters 510泵，Waters 486紫外检测器，Maxima 820色谱工作站。Rheodyne 7125型六通进样阀，配以50 μl定量管。盐酸西替利嗪标准对照品与CET片(规格10 mg/片,批号960520)均由江苏连云港制药厂提供；ZYR包衣片(规格10 mg/片,批号96A26/A)由比利时UCB公司生产。乙腈、磷酸、磷酸二氢钠、枸橼酸钠、乙酸乙酯、三乙胺、十二烷基硫酸钠（SDS）等实验试剂均为国产分析纯，水为重蒸馏水。
1.2 色谱分离条件 分析柱为Waters Nava-Pak C18(150 mm×3.9 mm ID,4 μm)色谱柱；流动相为乙腈∶磷酸二氢钠(0.02 mol/L)∶三乙胺(50∶50∶0.15, pH 3.15)，内含SDS 0.007 mol/L；流速 1.0 ml/min；检测波长 229 nm；柱温25℃。
1.3 血浆样品预处理 精密吸取血浆样品0.5 ml，置于10 ml具塞离心管中，加入pH 5.5枸橼酸钠缓冲液0.5 ml和乙酸乙酯5 ml，涡旋振荡 2 min，3 500 r/min离心5 min。分取乙酸乙酯层4 ml，置于另一10 ml具塞离心管中，加1.7％磷酸溶液100 μl反提，3 500 r/min离心5 min后，吸取磷酸溶液50 μl进样分析。
1.4 体内分析方法学评价 取健康人空白血浆共6份，精密添加盐酸西替利嗪标准对照品一定量，配制成10.0，25.0，50.0，100.0，200.0，400.0 ng/ml的盐酸西替利嗪标准血浆样品系列。按血浆样品预处理步骤和RP-HPLC测定方法进行操作，以测得的血浆中西替利嗪峰高（Y）为纵坐标，相应的浓度(c)为横坐标，其回归方程为：Y= 89.28 + 18.53 c， r=0.999 8（n=5）。以信噪比S/N>2计，血浆样品中西替利嗪最低检测浓度为2.5 ng/ml，最低检测限为 0.5 ng。选择25.0，100.0和400.0 ng/ml 低、中、高3种不同浓度的盐酸西替利嗪标准血浆样品以考察体内分析方法的回收率和精密度，结果盐酸西替利嗪标准血浆样品萃取回收率>70％ ,方法回收率>95％；日内相对标准差（RSD）<4.6％(n=5)，日间RSD<7.2％(n=5)。
1.5 研究对象与实验设计 男性健康志愿者8名，平均年龄（22.88±0.83）岁， 平均体质量（68.19±4.96） kg。所有志愿者经肝肾功能、血尿常规及心电图检查均正常，且精神良好；受试前1个月内未服用任何药物，禁忌烟酒。健康志愿者明了本试验的目的与要求，均签署知情同意书，并上报上海长海医院医学伦理委员会批准备案。
采用随机交叉试验，将8名健康志愿者随机分为两组，受试前隔夜禁食12 h，次日早晨空腹分别口服10 mg CET片和10 mg ZYR片，200 ml温开水送服。于服药后0.25，0.5，0.75，1.0，2.0，4.0，6.0，10.0，16.0，24.0，36.0 h从其左 (右) 肘静脉采血约 3 ml，血样置于肝素抗凝管中,2 500 r/min离心5 min后分取血浆，置-20℃冰箱保存待测。两次试验的间隔周期为2周。
1.6 数据处理与统计分析 西替利嗪血药浓度-时间曲线下面积（AUC）值由梯形法计算，其中AUC0～36由体内血浆样品中西替利嗪实测值计算，AUC36～∞根据消除相尾部 lnc-t直线斜率k值和36 h点西替利嗪血浆浓度计算。以ZYR片的AUC0～∞为参照，求算CET片的相对生物利用度。选择NDST 5.0统计分析程序，对主要药代动力学参数cmax 和AUC0～∞进行三因素方差分析和双单侧t检验（显著性水平α=0.05）。
2 结 果
2.1 色谱行为与典型谱图 在本研究建立的血浆样品色谱分离条件下，西替利嗪的保留时间约为5.3 min， 相应的理论塔板数每米约6 400。 图1为空白血浆和实测血浆样品的典型色谱分离谱图，显然西替利嗪与血浆中的内源性物质之间达到了良好的分离，其色谱峰位处没有其他杂质的干扰。
图1 血浆样品中西替利嗪的RP-HPLC分离谱图
Fig 1 RP-HPLC chromatograms after a single oral
dose of 10 mg cetirizine hydrochloride tablet
A：Blank plasma；B：Volunteer plasma
2.2 人体药代动力学 8名健康志愿者单剂量口服10 mg CET片和10 mg ZYR片后体内西替利嗪平均血药浓度-时间曲线见图2。结果显示盐酸西替利嗪在健康人体内的药代动力学过程呈一级吸收的二房室开放模型，其中CET片和ZYR片的主要药代动力学参数见表1。
图2 单剂量口服10 mg盐酸西替利嗪片
后体内平均血药浓度-时间曲线
Fig 2 Mean plasma concentration-time curve after
a single oral dose of 10 mg cetirizine hydrochloride tablet
●: CET tablet；○: ZYR tablet；（n=8）
表1 单剂量口服CET片与ZYR片后的药代动力学参数
Tab 1 Pharmacokinetic parameters after a single
oral dose of CET tablet and ZYR tablet （n=8,±s）
Parameter CET tablet ZYR tablet
Ka (t/h-1) 4.18±3.10 5.26±3.58
K10 (t/h-1) 0.18±0.06 0.17±0.05
t1/2ka (t/h) 0.27±0.18 0.18±0.09
t1/2α (t/h) 1.10±1.10 1.00±1.09
t1/2β (t/h) 10.71±3.06 9.95±2.41
tmax (t/h) 0.72±0.09 0.72±0.09
cmax (ρB/ng*ml-1) 316.71±39.66 314.80±31.79
AUC0～∞
(A/ng*h*ml-1) 2 728.52±356.06 2 753.01±360.33
2.3 相对生物利用度与生物等效性评价 8名健康志愿者单剂量口服10 mg CET片和10 mg ZYR片后体内西替利嗪AUC0～∞及相对生物利用度比较结果列于表2，其中平均相对生物利用度为（99.50±8.89）％。应用新药统计程序 NDST 5.0 对口服CET片和ZYR片后的主要药代动力学参数lncmax 和lnAUC0～∞进行三因素方差分析, 结果表明试验制剂间及交叉周期间无显著性差异(P>0.05)，仅健康个体间存在差异；进一步进行双单侧t检验，结果判定CET片和ZYR片具有生物等效性。
表2 单剂量口服CET片与ZYR片10 mg后的AUC
比较与相对生物利用度计算
Tab 2 AUC comparison and relative bioavailability after
a single oral dose of 10 mg CET tablet and ZYR tablet
No. CET tablet ZYR tablet Relativebioavail No. Period AUC0～∞ Period AUC0～∞ -ability(%)
(A/ng*h*ml-1) (A/ng*h*ml-1)
A 1 2 801.65 2 2 603.01 107.63
B 1 2 602.00 2 3 021.99 86.10
C 1 2 625.30 2 2 521.28 104.13
D 1 2 569.60 2 2 787.53 92.18
E 2 3 561.62 1 3 493.68 1 01.94
F 2 2 569.92 1 2 732.12 9 4.06
G 2 2 396.47 1 2 478.54 96.69
H 2 2 701.62 1 2 385.89 113.23
± 99.50
s 8.89
3 讨 论
目前，文献报道盐酸西替利嗪的体内分析方法主要为HPLC法、气相色谱（GC）法和高效薄层色谱法［6～8］。本实验借鉴文献［6］中离子对技术，以常用的SDS替代相对稀少的癸烷磺酸钠作为离子对试剂,同时考虑到西替利嗪分子结构中叔氨基团易与固定相表面残留的硅醇基产生离子交换作用，选择三乙胺竞争抑制或掩蔽游离硅醇基的活性，有利于碱性药物峰形对称并缩短保留时间。血浆样品预处理采用乙酸乙酯正提和稀磷酸反提两步操作,在保证萃取回收率的前提下,使体内样品提取物色谱分离干扰减少,并在强洗脱流动相条件下使血浆样品中微量西替利嗪组分快速出峰,极大地提高了检测灵敏度。本实验所需血样仅为0.5 ml,但最低检测浓度与文献［6］相当,且为GC体内分析方法［7］最低检测浓度的1/5。
Desager等［4］曾对成人单剂量口服20 mg西替利嗪水溶液和儿童单剂量口服5 mg西替利嗪水溶液后的药代动力学过程进行了研究，其中成人体内西替利嗪tmax为（0.62±0.22） h，t1/2β为（8.6±2.1） h；而儿童体内西替利嗪tmax相对延长，可达（1.07±0.45）h (P<0.01),t1/2β显著缩短，仅为（4.91±0.60） h (P<0.001)。本文研究结果表明，8名男性健康志愿者单剂量口服10 mg盐酸西替利嗪片后的体内药代动力学呈现一级吸收的二房室开放模型，tmax和t1/2β与文献报道的成人盐酸西替利嗪体内过程基本一致［4，5］。CET片和ZYR片的主要药代动力学参数cmax和AUC0～∞经三因素方差分析和双单侧t检验均无显著性差异，且CET片的相对生物利用度为（99.50±8.89）％。■
作者简介：范国荣（1966-），男（汉族），博士，主管药师
范国荣（第二军医大学长海医院药学部，上海 200003）
李珍（第二军医大学长海医院药学部，上海 200003）
胡晋红（第二军医大学长海医院药学部，上海 200003）
石晶（第二军医大学长海医院药学部，上海 200003）
沈意翔（第二军医大学长海医院药学部，上海 200003）
宋洪杰（第二军医大学长海医院药学部，上海 200003）
王卓（第二军医大学长海医院药学部，上海 200003）
参考文献
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