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主题:HBV DNA荧光定量检测
发信人: ke_gd()
整理人: huangzifan(2001-03-24 09:05:39), 站内信件

    虽然这是临床医学上的一个检验项目,但它的原理却是非常地有意思,很精巧,完全上是分子生物学的知识。
    HBV DNA就是检验人体内乙肝病毒基因的拷贝数,也就是看体内的病毒量有多少。检验的方法是PCR(Polymerase chain reation),即聚合酶链式反应。
    检验首先当然是先对血清进行HBV DNA抽提,最后得到DNA的悬浮液。这是我们需要的模板。然后以此为模板进行第一次的PCR,这次PCR是不对称扩增,即只对双链的DNA进行单链扩增。
    第一次PCR结束后(只有16个循环左右,即普通PCR的一半),再加入另一对带荧光信号的引物,再进行第二次的PCR(反应条件大致同上一次,可以看作是上次PCR的延伸)。这对引物结合时是带荧光信号的,分开后则能量消失。由于反应液内含有大量的单链片段,它们只与带荧光信号的引物中的一条相结合,所以随着反应循环数的增加,反应液内的荧光量也逐渐减少,我们就在每两个循环检测一次荧光量,每次数值的变化是可以通过公式用直线表示出来的,不同浓度的标本都有其特定的直线,不同浓度间的直线是呈平行线关系,浓度越高,则直线出现得越早。通过与标准对照品的直线相比较,我们就可以知道人体内的病毒量是多少了。这种检测方法还是挺灵敏的,重复性也好。

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