发信人: tannic()
整理人: phoenixlab(2000-09-30 05:18:45), 站内信件
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DNA定量的意义在于能够很好的区分良性及恶性肿瘤、及肿瘤的治序观察、肿
瘤的程度等。
DNA图像分析的技术要求
所有针吸活检及脱落细胞涂片均适用于DNA图像分析。此外，单层细胞培养玻
片，新鲜组织印片也可进行DNA图像分析。这些样本涂片经空气干燥，福尔马林固
定后可保存多年。对已在H.E染色或巴氏染色的细胞涂片，经F染色后可自动退染
，对于福尔马林固定石蜡包埋组织，可选择有意义的病变区域行的厚切片，消化
分离后，也可做DNA图像分析。已有报告直接采用组织切进行DNA测量。
准确的测定细胞内DNA含量的多少，要依赖于能够准确的将DNA染色，目前浒
的方法即进行福尔根染色，由于操作上的准确熟练程度不同，DNA含量的着色程度
亦不尽相同，故而要准确测量DNA含量，染色过程及步骤要严格控制，每一次测量
的样本，尽量是要成批染色。DNA含量是以DNA着色的程度而反应出来，DNA含量丰
富，染色深。对于图像分析系统来讲，就是测量DNA着色的程度，即吸光度值，据
吸光度的不同来反应出DNA含量的不同。
固定 涂片或印片经空气干燥后，在染色前必须经10%的福尔马林缓冲液固定
30分钟以上，固定的目的有两个：(1)末经固定的细胞核在F染色的水解过和中，
会使DNA形成小片段，游离出细胞核，影响DNA测量的准确性；(2)固定可以封闭那
些在水解前产生的醛基，减少假日性产物。
染色 DNA图像分析所测量的样本，应采用F染色。影响F染色的因素很多，其
中主要的步骤是HCL水解。如果水解时间过长，温度过高，HCL可以将DNA分子切割
成小片段，一些很小的片段则会游离出细胞丢失掉，因此水解过程应严格控制。
推荐采用4NHCL，在27.5水解55分钟。Feulgen染色所使用的Shiffi`s试剂有两种
：一种为副品红（Parafuchisine），染色后呈紫红色，一种为硫堇（Thionine）
，染色后呈兰色。
仪器设备 (1)滤光片 为了吸收特定波长光线，测量时应采用滤光片，硫堇染
兰色者，使用590+10nm波长的滤光片，副品红染紫红色者使用560+10nm波度的滤
光片。(2)校正系统的密度量函数的直线性应为：=0.99。(3)为减少显微镜的偏离
光，应使用低数值孔径聚光镜(<0.25)。(4)使用物镜40，以保持足够聚焦深度。
(5)应具有稳定的电源及光照系统，测量前调节好适合摄像机工作的光照度，在测
量期间不要改变光照度。(6)在测量每1例样本开始时先检测背景吸光度。(7)采用
校正光照系统的软件程序，以减少不同大小相同DNA含量细胞之间的相对误差。如
果没有该系统程序，则需在测量时使用不同类型细胞吸光度值（IOD）的校正因子
。(8)电视密度测量系统应具有下述质量标准：1>同一个二倍体细胞在屏幕的27个
位置上测量，其变异系数（Coefficient of variance,CV）应<2%。2>在屏幕的2
7个不同位置上测量同类型的27个二倍体细胞，其CV值应<3%。
参照细胞 淋巴细胞、中性白细胞、上皮细胞及间质细胞都能做为正常二倍参
照细胞。每一样本参照细胞的CV值应<5%。参照细胞应与分析细胞同时固定染色，
并在相同的光照系统下测量。
分析细胞 为了得到一个准确可靠的主峰倍体值，所用测量的分析细胞不得少
于200个。对于聚焦不清，相互重叠及坏死的细胞都不应测量，此外，还应删除那
些碎片及其他人工假象。
对DNA图像测量结果的分析
在对DNA图像测量结果分析时，应考虑一些生理性及非生理性因素的影响。在
一些生理情况下（如子宫内膜的A_S现象、支气管、宫颈、胃粘膜上皮、心肌细胞
、肝细胞、间皮细胞以及乳腺和甲状腺的嗜酸性细胞）都可以出现细胞的多倍体
化（P）。某些非生理因素如病毒和放射治疗以及维生素B缺乏等也可使细胞出现
多倍体化。在除外上述因素后，再对DNA测量的数据和直方图进行分析。
主峰倍体值（Stemline ploidy） 如果主峰倍体值<1.9C或>2.1C则可认为该
样本为非整倍体。如果参照细胞的CV值<3%则主峰值只要<1.94C或>2.04C即可定为
非整倍体。
单细胞值（Single cell） 当主峰倍体值在1.9~2.1C时,以单细胞值做为判断
非整倍体的标准。在无多倍体化组织中，以细胞超过5C，为非整倍体；在多倍体
化组织中单细胞应超过9C，方定为非整倍体。
二倍体偏离指数（2C deviation index） 显示肿瘤细胞DNA主峰含量偏离二
倍体(2C)的程度，在表达DNA含量的异常程度上要较DNA指数更为精确。
DNA指数（DNA index of stemline,DI） 为肿瘤细胞DNA主峰值与正常值参照
细胞的峰值之比DI<1.10和>0.90为整倍体细胞，超过此值为非整倍体细胞。
Auer分型（Auer type） 根据DNA直方图形态，分为4型:I型,主峰值位于2C或
近2C处.。II型，在4C处出现峰值，可以伴有或没有2C的主峰值，以上两型均属整
倍体。III型，主峰值位于2C和4C区以外。IV型，直方图中缺乏主峰且分布范围广
泛，后两型属非整倍体。
DNA恶性度分级（DNA malignancy grade，DNA_MG） 根据DNA图像分析结果，
计算出DNA恶性度，范围从0~3，数值越接近3，恶性度越高，预后也越差。
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※ 来源:．月光软件站 http://www.moon-soft.com．[FROM: 10.59.68.93]
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